端粒长度检测技术介绍

端粒长度检测技术介绍

一、技术概述

端粒是位于染色体末端的保护性结构，其长度与细胞衰老、疾病发生及个体寿命密切相关。本实验采用SYBR Green染料法结合实时荧光定量PCR（qPCR）技术，通过特异性引物扩增端粒序列与单拷贝基因，实现端粒长度的相对定量分析。该方法灵敏度高、重复性好，可精确反映样本端粒动态变化。

二、实验目的

通过提取样本基因组DNA，利用qPCR技术扩增端粒重复序列与单拷贝基因，计算端粒相对长度（T/S比值），为衰老研究、疾病机制探索及生物标志物开发提供关键数据支持。

三、实验流程

1、DNA抽提

取约200ul血液样品至1.5mL离心管中，严格按照“TIANamp Genomic DNA Kit”说明书步骤进行提取，详见说明书附件。

最后洗脱的步骤时，加入了50uL洗脱缓冲液TE进行洗脱。

2、定量PCR检测

1）将Mix在4℃下融解，轻柔地上下颠倒混匀并进行短暂离心。

2）冰上配制下表中的反应液

成分 加入量 终浓度

HieffTM qPCR SYBR® Green Master Mix (No Rox) 5μL 1×

Forward Primer (10μM) 0.2μL 0.2 μM

Reverse Primer (10μM) 0.2μL 0.2 μM

DNA 2uL

RNase Free dH2O 补足至10 uL

3）将反应管进行短暂离心，确保所有反应液在反应孔底部。

4）采用三步法程序进行反应：

循环数 步骤 温度 时间 荧光采集

1 预变性 95℃ 5min No

40 变性 95℃ 10s No

退火 60℃ 30s Yes

上述反应结束后，从60℃～95℃过程中进行熔解曲线分析

四、技术优势

✅  高特异性：熔解曲线分析确保扩增产物特异性，避免假阳性

✅  高通量：支持多样本并行检测，节省实验时间

✅  数据可靠：采用内参基因校正，确保结果准确性

✅  应用广泛：适用于血液、组织、细胞等多种样本类型

五、适用范围

1️⃣衰老机制研究与抗衰老药物评价

2️⃣ 癌症、心血管疾病等与端粒缩短相关的病理研究

3️⃣ 干细胞功能评估与再生医学应用

4️⃣环境毒理与辐射暴露对端粒影响的监测

5️⃣ 整合基因组学数据，构建端粒动态变化模型

六、代表性实验结果

七、客户提供

1 细胞样品: ＞2×106；细胞培养上清≥1ml

动植物组织/细菌、真菌样品: ＞100mg（黄豆粒大小）；

血清、血浆、全血及其他体液样品: ＞200μl；

RNA/DNA/cDNA:  v≥10μl，c≥50ng/μl

2 物种信息及基因信息

（注：组织样品需液氮速冻、保存于-80度，样品使用干冰寄送，避免污染和反复冻融）

如您希望进一步了解该实验的技术细节、数据展示或定制化服务，欢迎联系我们的科研服务团队！