1993 年，科研人员在骆驼科动物血清中首次发现一类天然缺失轻链（VL）的特殊抗体，这类抗体仅由两条重链（VH）构成，分子量仅约 15 kDa，因体积微小被命名为纳米抗体（VHH），又称单域抗体。后续研究进一步在羊驼、鲨鱼等物种中也发现了此类抗体。凭借结构简单、组织穿透性强、稳定性优异等独特优势，纳米抗体迅速成为生物医药领域的研究热点，尤其在肿瘤靶向治疗中展现出理想应用前景 —— 其强大的穿透能力可直达传统抗体难以触及的病灶深处，助力提升药物疗效并降低副作用。尽管鲨鱼等动物也能产生类似结构的抗体，但羊驼具有易于养殖、免疫效率高、经济收益可观等特点，因此成为目前单域抗体制备的主流宿主。

羊驼作为骆驼科动物的代表，其免疫系统在纳米抗体制备中具备多重不可替代的优势：

抗体性能优异：羊驼针对特定抗原产生的纳米抗体具有高度特异性与亲和力，为疾病的精准诊断与靶向治疗奠定基础；同时，这类纳米抗体继承了重链抗体的先天优势，耐高温、耐极端 pH 值，稳定性与水溶性远超传统抗体，能适应复杂的体内外应用环境。

结构简单易改造：纳米抗体无轻链结构，基因编码序列简洁，可轻松实现人源化改造，降低临床应用的免疫原性风险；其表达系统适配性强，在酵母等微生物体系中即可高效规模化生产，大幅降低制备成本。

组织穿透能力突出：15 kDa 的极小分子量，使羊驼源纳米抗体能穿透实体瘤致密基质等生理屏障，抵达病灶深层发挥作用，这一特性使其成为肿瘤治疗药物的理想载体。

纳米抗体文库的构建以噬菌体展示技术为核心，同时可结合核糖体展示、酵母表面展示技术筛选高亲和力克隆，文库类型涵盖天然抗体库、免疫抗体库、合成抗体库及半合成抗体库。其中，基于羊驼免疫的抗体文库构建流程标准化程度高，核心步骤如下：

抗原免疫与 B 细胞富集：选取健康羊驼，用目标抗原进行多轮免疫，刺激机体产生特异性免疫应答，诱导 B 细胞增殖分化为分泌纳米抗体的浆细胞；免疫周期结束后，分离羊驼外周血单个核细胞（PBMC），获取富集特异性 B 细胞的细胞群。

基因模板制备：提取 PBMC 中的总 RNA，严格保证 RNA 的完整性与纯度；以 RNA 为模板，通过逆转录合成 cDNA，作为后续基因扩增的模板。

VHH 基因扩增与载体构建：以 cDNA 为模板，进行两轮 PCR 扩增，特异性扩增编码纳米抗体的 VHH 基因片段，提升产物的特异性与产量；将扩增后的 VHH 基因克隆至噬菌体展示载体，构建噬菌体展示文库。

文库表达与阳性克隆筛选：将构建好的文库转化至大肠杆菌、酵母等宿主细胞，诱导宿主细胞表达融合蛋白，使 VHH 片段展示于噬菌体表面；利用抗原包被的固相介质或磁珠液相淘选技术，进行多轮 “吸附 - 洗脱 - 扩增” 筛选，富集与靶标蛋白高亲和力结合的阳性噬菌体克隆。

测序鉴定：对筛选得到的阳性克隆进行基因测序，获取 VHH 基因的序列信息，为后续的表达优化与功能验证提供依据。

高效的免疫方案是获取高质量纳米抗体的前提，核心技术围绕佐剂选择与免疫原类型两大核心展开：

佐剂的作用是增强抗原的免疫原性，延长抗原在体内的刺激时间，常用佐剂分为两类，各有优劣：

弗氏佐剂：通过形成油包水乳剂，使抗原在机体内缓慢释放，大幅延长免疫刺激周期，非特异性增强机体免疫应答，显著提升抗体的亲和力与产量。但该佐剂毒性较强，注射后易引发局部炎症、组织坏死或溃疡，不适用于人用疫苗与抗体药物的制备。

水溶性佐剂：相较于弗氏佐剂，具有毒性低、生物相容性好的优势，适用于临床级抗体药物的研发；其制备无需复杂乳化过程，操作简便，注射后局部反应轻微。但因不形成缓释体系，抗原在体内释放速度快，免疫刺激时间较短，需通过增加抗原剂量或延长免疫周期，确保机体产生有效免疫应答。

免疫原的选择直接影响纳米抗体的特异性，常用类型及使用要点如下：

蛋白质免疫原：需保证高纯度，且能模拟天然抗原表位，是最常用的免疫原类型；

小分子免疫原：因分子量小、免疫原性弱，需与载体蛋白偶联后使用，增强免疫原性；

病毒型免疫原：必须经过严格灭活处理，确保无致病性，避免引发宿主感染；

此外，还包括多肽免疫原、DNA/RNA 免疫原、细胞系免疫原等，需根据靶标特性与研究需求合理选择。

羊驼源纳米抗体凭借制备便捷、性能优异的特点，已成为肿瘤治疗、疾病诊断等领域的新型生物工具。随着文库构建技术的优化与免疫方案的完善，其在生物医药领域的应用边界将持续拓展。