酵母蛋白表达技术之所以成为生物领域的经典工具，核心在于其兼具真核生物的表达特性与原核系统的便捷性，优势集中体现在四方面：
真核蛋白加工能力：作为真核宿主，酵母具备完整的翻译后修饰系统，可实现糖基化、磷酸化、二硫键形成等关键修饰，确保外源蛋白正确折叠，结构与功能更接近天然蛋白，解决了原核系统无法完成复杂修饰的痛点。
高效规模化潜力：毕赤酵母等菌株携带 AOX1 等强诱导型启动子，在甲醇等诱导剂作用下，外源蛋白产量可达克级 / 升；同时酵母适应高密度发酵，发酵过程易控制，可无缝衔接实验室小试与工业级大规模生产。
遗传操作简便：酵母载体多为穿梭载体，可在大肠杆菌中复制扩增、酵母中表达，大幅简化载体构建流程；酿酒酵母、毕赤酵母等模式菌株遗传背景清晰，转化方法成熟（电穿孔、PEG 诱导等），筛选阳性克隆效率高。
安全经济特性：酵母培养仅需简单培养基，成本远低于哺乳动物细胞；且无内毒素污染风险，产物安全性更高，无需额外去除内毒素的繁琐步骤。
二、主流酵母表达系统解析毕赤酵母表达系统：应用最广泛的酵母表达系统，甲醇营养型特性使其具备强诱导表达能力，AOX1 启动子受甲醇严格调控，适合分泌型与胞内蛋白表达。优势是分泌效率高、糖基化修饰均匀，常用于抗体片段（scFv、纳米抗体）、疫苗抗原、工业酶等产品的规模化生产。
酿酒酵母表达系统：首个被驯化的真核表达宿主，GRAS 认证（公认安全），遗传操作技术最成熟。虽分泌效率略低于毕赤酵母，且可能存在过度糖基化，但胜在安全性高、培养周期短，适合早期蛋白功能验证、对糖基化要求不高的重组蛋白生产。
其他特色系统：乳酸克鲁维酵母可利用多种碳源，适合组成型表达；解脂耶氏酵母油脂合成能力强，适配脂溶性蛋白或酶的表达，这些系统为特殊需求的蛋白表达提供了更多选择。
三、酵母蛋白表达的标准化流程酵母蛋白表达遵循 “基因优化 - 载体构建 - 转化筛选 - 诱导表达 - 纯化鉴定” 的标准化流程：
基因与载体构建：根据宿主密码子偏好性优化目的基因（如毕赤酵母偏好富含 A/T 的密码子），将基因插入含启动子、信号肽、筛选标记的表达载体（分泌型载体含信号肽，可引导蛋白分泌至培养基）。
质粒线性化与转化：用限制性内切酶处理载体使其线性化，暴露同源臂，通过电穿孔或 PEG 诱导法转入酵母细胞，利于外源基因整合到酵母染色体。
阳性转化子筛选：借助营养缺陷型标记（如组氨酸缺陷）或抗生素抗性标记，筛选成功整合外源基因的阳性克隆，避免假阳性干扰。
诱导表达与纯化：将阳性克隆接种至发酵培养基，添加诱导剂（如甲醇诱导毕赤酵母），控制温度、pH 等条件促进蛋白表达；收集发酵液或细胞裂解液，通过层析、沉淀等方法纯化蛋白，最终经 SDS-PAGE、Western blot 验证蛋白纯度与正确性。
四、经典应用领域：从实验室到产业化生物医药领域：是治疗性蛋白的核心生产平台，可生产胰岛素、细胞因子、抗体片段等，毕赤酵母表达的 HPV 疫苗抗原、抗体制剂已实现商业化应用。
工业酶制剂领域：大规模生产蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶等，广泛用于食品加工（面包发酵、奶酪制作）、纺织（纤维脱胶）、造纸（浆料漂白）等行业，降低工业生产成本。
